发布日期： 2025-02-17 06:46:30 来源：贝博BB平台app免费下载
已成为要害东西。 但是，小鼠原代免疫细胞的基因转染一向面对低功率、高死亡率等技能难题。 现有的转染办法 （如慢病毒、电转、脂质体等） 在这些细胞中作用欠安，特别是在基因修改等触及大片段基因投递的研讨中，这一瓶颈尤为显着。
为打破这一技能难关，西湖凝集体与西湖大学的研讨团队联合开发了ProteanFect CRISPRMax 小鼠免疫细胞转染试剂盒。该立异体系选用全新核酸投递战略，成功处理了传统办法的约束，能够 高效投递大片段核酸，完成小鼠原代免疫细胞的高效基因修改。
上述成果来源于陆军军医大学的研讨者，研讨中运用了 ProteanFect CRISPRMax 小鼠免疫细胞转染试剂盒 （PT06） 。在该试验中，小鼠原代 T 细胞共转染了 Cas9 mRNA、意图基因 sgRNA 和 EGFP-mRNA （其间EGFP mRNA用于方针细胞的挑选） ，成功完成了以下作用：
1、高转染功率：在总细胞中， 79.5% 的细胞完成意图基因敲除 ；而在 EGFP 阳性 T 细胞中， 97% 的细胞完成意图基因敲除 ，基因敲除作用显著。
2、高效共转：可利用挑选标签 （如EGFP、Puro等） 方便地富集成功基因修改的细胞。
3、低细胞毒性：试验成果为，转染后的小鼠T细胞生存率高，且生理功能未受影响。
ProteanFect CRISPRMax 选用了一种立异的生物分子凝集体技能：ProteanFect 经过将蛋白分子和核酸自拼装成一种规矩的纳米颗粒，这些纳米颗粒能够经过细胞的自动内吞机制进入细胞内部。这些颗粒安稳而功能强大，可维护 mRNA 免于降解并坚持其活性。此外，这种规划无需额定的化学修饰，由此减少了细胞毒性，显着提高试验的安全性。
图2. ProteanFect蛋白分子与mRNA可在体外自拼装构成蛋白纳米颗粒
ProteanFect 无需运用病毒载体或电转技能，避免了病毒或许带来的免疫反应和安全危险，也避免了电转对细胞的损害。ProteanFect 与其他常用转染办法的比照 ：
高效功能——转染功率可达 70%-95% ，可一起投递多种核酸，共表达率超 90% ， 适用于人源和小鼠原代免疫细胞 ；
杰出安全性—— 非病毒、非电转、非脂质体规划，根据内源蛋白，生物相容性极佳，显着下降细胞损害；
体系灵敏——不受细胞数量约束，从 103 – 108 个细胞都能够转染。
ProteanFect 不仅在小鼠原代T细胞中体现杰出，还能应用于以下范畴：
小鼠原代免疫细胞的基因修改（NK细胞、γδ T 等免疫细胞），以及人源化小鼠免疫细胞