发布日期： 2025-03-01 13:45:57 来源：新闻中心
PEI（聚乙烯亚胺）是一种常用的转染试剂，大规模的应用于生物学研讨范畴。作为一种根据阳离子聚合物的转染试剂，PEI具有高效、安全及合适运用的规模广等许多长处。其最大的作用是将DNA包裹成带正电荷的微粒，然后防止DNA被降解。接着，这些带正电荷的微粒能够黏附于细胞外表的负电荷残基上，并经过胞吞作用进入细胞内。一旦进入细胞，PEI与DNA的复合物会在低pH环境中开释，使DNA自在融合到细胞核内。那么，你知道
PEI转染试剂一般为粉末状，在运用前需求制造成溶液，PEI转染试剂的制造办法如下：
1.精确称取1.0 g PEI粉末，并将其溶解在800 mL细胞培育级水中。
2.向PEI转染试剂中逐步增加1.0 M NaOH，一起用pH计监测，将pH调理至7.0 +/- 0.2。3.增加细胞培育级水以制造PEI转染试剂，使总体积到达1000 mL。
那怎么进行转染操作呢？咱们以东西细胞HEK-293T（人胚肾细胞）为例，转染体系为12孔板，具体操作如下：
1.转染前，铺板12孔板，悄悄混匀细胞，使其在孔中均匀分布，置于37℃培育箱过夜（24h）培育，待细胞汇合度60-80%进行转染。37℃水浴加热10% FBS、DMEM 30 min；
3.将混合液参加待转染的细胞内，培育6-8h后更换为10%FBS的DMEM持续培育48 小时后收样。
以上是怎么制造pei转染试剂以及转染操作进程，咱们再来看下转染进程的注意事项：
1.质粒的表达作用是转染的要害，一般情况下咱们应该对质粒的表达及功率进行开始的检测，除了琼脂糖电泳、测序确认质粒构建的成功与否外，还需求再进行细胞水平检测转染作用。一般能在质粒上增加GFP、mCherry等荧光标签，就能够在荧光显微镜下直接调查转染作用。若不能增加标签，也能够一起转染带有荧光的mock质粒作为阳性对照。
2.转染后换液能够直接进行条件探索，相同以PEI为例，若细胞状况好的情况下，能够再一次进行挑选是否在8h进行换液，不换液转染作用要比8h换液略高些，可是若细胞状况较差，主张厚道换液为好。