发布日期： 2024-10-08 17:44:03 来源：新闻中心
siRNA转染是分子生物学常见的实验之一。在siRNA转染实验中，siRNA转染试剂的选择尤为关键，需要考虑转染试剂的转染性能、细胞毒性和操作方便性。目前，实验室常用的siRNA转染试剂品牌主要有赛默飞的Lipo3000、 RNAiMAX和百代生物的RFect与RFect V2。其中，RNAiMAX是国际公认的siRNA转染试剂权威产品，RFect是国产知名siRNA转染试剂，RFect V2是RFect 的最新升级产品，很多实验室反应其siRNA转染性能非常优异。RNAiMAX与RFect V2比较，各自的siRNA转染性能如何，本文拟简要叙述如下。
siRNA转染性能，无疑是评价一款siRNA转染试剂实力的首要指标。不仅要看转染阳性率，更要看基因沉默效率。
RFect V2的最大突破就是专门配置了Trans Enhancer，又叫siRNA转染增强剂，可大大降低细胞膜的免疫排异反应的同时，明显提升了siRNA转染的效率，较升级前的RFect siRNA转染试剂的转染效率还可高出5-30%。那它的转染性能表现和RNAiMAX相比又如何呢？我们实验室按照两款试剂的说明书，以24孔板的推荐比例，在用于做体外质控的Hela细胞融合度达到30-50%时，分别以1.5μL的RFect V2和1.5μL的RNAiMAX转染试剂配制转染复合物进行转染，48h在荧光显微镜下观察其转染阳性率。结果显示，两者的转染阳性率都可达90以上，说明同等量的转染试剂，RFect V2与RNAiMAX的转染阳性率不相上下。
如果说转染阳性率只是一个直观的结果，并非是验证两者转染性能的“金标准”，那么还一定要通过RT-qPCR来检测其基因沉默效率从而得出结论。为此，我们将能够敲降SSB基因的小干扰核酸分别通过RFect V2和RNAiMAX转染进Hela细胞，利用RT-qPCR检测转染24h后SSB的mRNA表达水平。如图所示，使用RNAiMAX转染的实验组CT值分别为21.91、21.95，使用RFect V2实验组的荧光定量检测结果相比于RNAiMAX略高出0.13-0.14个CT值，两者结果非常相近，表明RFect V2和RNAiMAX转染siRNA沉默基因的效率基本一致。
细胞死亡率对细胞转染实验结果的影响很大，尤其是我们在研究基因沉默效率时，死亡细胞的那部分也会表现为目标mRNA表达水平的降低，因此siRNA转染试剂必须对细胞作用温和，才能实现实验结果的准确性与可靠性。
RFect V2使用了新型可降解纳米材料，和升级前的RFect相比，细胞毒性更低，并且成分上区别于以阳离子脂质体为主要成分的RNAiMAX。众所周知，siRNA转染试剂的毒性越低，其要求的转染密度也越低。在这方面，无论是RNAiMAX，还是RFect V2，都做到了转染密度在30-50%时就能取得高效的转染结果。依照我们实验室的数据，使用RNAiMAX转染Hela细胞后，细胞死亡率约为10%左右，使用RFect V2转染Hela细胞后，细胞死亡率只有5%左右，似乎还略优于RNAiMAX。可以说，RFect V2在细胞毒性方面的表现是令人惊喜的。
以研究者的方面出发，实验的简便性也十分重要。主要看两方面，一种原因是需不需要特殊培养基，第二方面是需不需要换液。
特殊培养基一般是用来配制转染复合物的，因为血清的存在往往会影响转染复合物的形成，所以说一定要使用减血清培养基或是无血清培养基。RNAiMAX的说明书里面就已精确指出需要用Opti-MEM减血清培养基来稀释转染试剂和siRNA，而试剂盒内并不提供这种培养基，因此实验者还需额外购买。这方面，RFect V2盒内配置有专研的转染增强剂，可完全替代无血清培养基，不仅提升了转染效率，也省去了购买特殊培养基的开支，为研究者提供了便利。
在换液问题上，研究者要根据每个转染试剂的说明书来。RFect V2不仅有很强的抗血清干扰能力，无需在转染前更换无血清培养基，而且由于对细胞毒性极低，因此也无需在转染4-6h后进行换液，换液反而会造成转染效率降低。RNAiMAX同样在说明书里面表明无需换液，但有些科研者在分享转染经验时还是建议转染后4-6小时最好更换培养液，可能对于一些敏感的细胞如果不按时换新鲜的培养基，细胞死亡率还是比较高的。不过，对于大多数耐受性强的细胞，RNAiMAX还是有相当的好的转染效率的。因而，研究者在选择使用RNAiMAX时，可根据细胞对转染试剂的敏感度自行判断要不要换液。
总的来说，RFect V2在各方面都有媲美RNAiMAX的性能，对于研究者来说，确实是一个不错的siRNA转染试剂新选择。