发布日期： 2024-12-23 10:14:36 来源：贝博BB平台app免费下载
DNA和siRNA转染是细胞生物学最常见的实验之一。对此类核酸转染实验，转染试剂的选择特别的重要。从严格的专业角度看，由于DNA和siRNA在分子大小、载电荷以及分子构型方面存在比较大差异，DNA转染最优选择专门的DNA转染试剂，siRNA转染最优选择专门的siRNA转染试剂。但有些研究者需要将两者同时或先后转入细胞，也有些研究者经费不够宽裕，出于实验需求，这些研究者都希望配置一款既能转染DNA又能转染siRNA的转染试剂。
目前，市场上既能高效转染siRNA又能高效转染DNA的转染试剂非常之少。其中，Lipo3000(Lipofectamine3000)是国际公认的既可转染siRNA又可转染DNA的权威品牌，Starvio DNA&siRNA是海归科学家研发的较为知名的国产品牌，拥有核心知识产权，采用可降解生物纳米材料配制而成。Starvio DNA&siRNA与Lipo3000相比，各自的性能特点如何，本文拟从转染性能、毒性和操作简便性三个方面简述如下。
转染性能是研究者在选择转染试剂时最为关注的指标。一款转染试剂无论对于普通的细胞株还是难转染的细胞，都具有不错的转染效率才能成为研究者的“实验好搭档”。
Hela细胞是实验室常用的宫颈癌细胞株，由于具有无限增殖的特性，常被用于肿瘤研究、细胞转染等实验中。在验证转染试剂性能时，也常将这种细胞株用于质量控制。个人会使用Starvio DNA&siRNA和Lipo3000分别转染Cy3-siRNA到Hela细胞中，并于24h在荧光显微镜下观察转染效率，结果显示两款转染试剂对siRNA的转染阳性率均达到了90%以上（图A和B）。
在进行DNA转染性能比较时，我们选取了AAV-293细胞。AAV-293是进行病毒包装和重组蛋白表达较为常用的工程细胞，个人会使用Starvio DNA&siRNA和Lipo3000分别转染GFP质粒到AAV-293细胞中，48h观察两组转染效率。结果显示，Starvio DNA&siRNA和Lipo3000在AAV-293细胞中的转染阳性率非常相近，均达到了90%以上（图C和D），而Starvio DNA&siRNA的细胞荧光似乎更为强烈。
为了进一步探究Starvio DNA&siRNA和Lipo3000的转染实力，我们在较难转染的原代细胞中也进行了实验。同样，我们将siRNA和质粒DNA分别转入原代肺癌细胞中，在24h及48h观察其转染结果。由于实验中，使用Lipo3000的实验组对原代肺癌细胞的毒性稍大，细胞死亡率较高，因此主要以Starvio DNA&siRNA的转染结果来和大家做个分享。根据荧光图显示，在原代肺癌细胞中，Starvio DNA&siRNA对质粒的转染阳性率可达85%，对siRNA的转染阳性率可达90%（图E和图F）。这样的转染结果其实是非常难得的，对于经常与原代细胞打交道的研究者们来说也是一个好消息。我们都知道，原代细胞是直接从机体分离培养的细胞，细胞膜相对较厚，而且表面有许多微绒毛和微细突起，这些结构会影响转染试剂与细胞膜的结合，以此来降低转染效率。由于原代细胞对环境毒性较为敏感，在进行转染实验时，细胞的死亡率也会大大高于普通细胞株。因而，原代细胞的转染存在比较大的难度，研究者往往很难寻找到一款理想的转染试剂。
为了比较Starvio DNA&siRNA和Lipo3000的细胞毒性，我们在原代大鼠主动脉平滑肌细胞中进行了小核酸NC-FAM 转染。结果显示，Starvio DNA&siRNA转染后的细胞死亡率只有5%左右，与空白对照的细胞死亡率几乎一致，这说明Starvio DNA&siRNA的细胞毒性极低，可能与其成分主要为可降解生物材料有关。使用Lipo3000进行转染，细胞死亡率约在10%左右，比Starvio DNA&siRNA略高。总体而言，两款转染试剂的细胞毒性都不算太高，研究者并不是特别需要担心因细胞毒性太大而对实验结果产生较大的影响。如果是对毒性较为敏感的细胞株或原代细胞，使用Starvio DNA&siRNA转染效果可能更为理想。
转染试剂的操作简便性主要看二个方面，一方面看在实验过程中要不要频繁的换液，另一方面看要不要购买其它的配套试剂。使用Starvio DNA&siRNA，在制备转染复合物时，只需要加入实验室常备的1640或DMEM即可，不需要购买转染试剂以外的其它试剂，没有额外花费。使用Lipo3000，在制备转染复合物时，则需要加入Opti-MEM™ I 减血清培养基，该试剂需要另外购买。换液方面，使用Starvio DNA&siRNA，在转染复合物加入细胞培养孔之后6小时，细胞生长状态良好，并不是特别需要换液，这显然与Starvio DNA&siRNA的细胞毒性较低有关。使用Lipo3000，在转染复合物加入细胞培养孔之后6小时左右，建议最好更换新鲜的培养基。
总体而言，Starvio DNA&siRNA有很优异的DNA和siRNA转染性能，可完全媲美Lipo3000。对于一些对细胞毒性较为敏感的细胞株或原代细胞，使用Starvio DNA&siRNA转染效果可能更为理想。对于一些希望控制研究经费的研究者，Starvio DNA&siRNA也是一个比较理想的选择。
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