发布日期： 2024-11-10 01:05:44 来源：贝博BB平台app免费下载
所搅扰基因自身及剖析办法。可设置不一样的孵育时刻进行试验以确认最佳孵育时刻。
转染试验关键： 转染进程不行增加抗生素，否则会导致细胞逝世； 初次试验 siRNA 的用量可稍大（一般 10 nM） ，后续试验依据试验成果修正。
转染试验优化: 为了更好的进步转染功率，最好对转染条件来优化，特别是初次运用。例如：24 孔培育板，调整 siRNA 与 RFect 试剂的用量。
RFect 小核酸转染试剂是世界闻名科学家崔坤元博士领导我公司研制团队在美国西雅图试验室研制成功的一种新式的小核酸转染试剂。RFect 可用来转染 siRNA、antisense RNA、microRNA 等 200bp 以内的小分子 RNA 和 DNA，转染细胞包含绝大多数贴壁成长的细胞，如一般细胞 株、肿瘤细胞株等。现在，不管国外仍是国内，转染试剂的主要成分均为脂质体或聚乙烯亚胺(Polyethylenimine, PEI)，这两种成分都具有很 大的细胞毒性，而且转染作用欠好。RFect 选用新式的动物源性的纳米资料，毒性很低而且具有十分杰出的转染功能。与其它品牌的小核酸 转染试剂比较，RFect 的细胞转染阳性率一般在 90%以上，Lamin A/C 基因按捺功率在 95%以上，而其它品牌转染试剂的细胞转染阳性率一 般不超越 70%，Lamin A/C 基因按捺功率不超越 75%。RFect 细胞毒性很低，转染细胞逝世率不到 10%，而其它品牌试剂的转染细胞逝世率 一般在 30%以上。血清对转染作用没影响，不用故意增加或替换培育液。有关 RFect 小核酸转染试剂的资料组成和试剂制造咱们已申请了 世界专利，并经过 PCT 掩盖世界上多个国家和地区。
◎杰出的细胞转染功能：细胞转染阳性率高达 90%以上，基因敲除作用 显着，A549 细胞 Lamin A/C 基因敲除功率在 95%以上
◎极低的细胞毒性：转染细胞逝世率不到 10%，大幅度的降低了因细胞毒性 对试验成果的影响
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操作过程：本说明书适用于 24 孔培育板的转染试验，其他标准的培育板的用量参照下面表格，表格给出的是每孔的用量与体积。 A. 细胞接种：转染前一天接种细胞，每孔 500 μl 培育基（不行加抗生素），使细胞在转染时密度在 30-50% 。 B. siRNA-RFect 混合物预备： 1. 6pmol siRNA 用 50μl 无血清培育基稀释。 2. 2μl RFect 用 50μl 无血清培育基稀释。悄悄混匀，室温孵育 5min。留意：保证在 25 min 内履行第三步操作，不要过于推迟。 3. 孵育 5min 后，将 siRNA 稀释液与 RFect 稀释液混合（总体积 100μl）。悄悄混匀，室温孵育 20 min。 C. 将混合物加到培育的细胞内（彻底培育基培育）： 1. 将 100μl 混合物参加培育孔内，培育孔内含有 0.5ml 培育的细胞。悄悄晃动培育板，混匀。 2. 37°C 培育 18-72h，检测基因限制作用。若需求，细胞培育 4-6h 时能够替换培育基，但不是有必要。孵育时刻的长短，取决于细胞类型、