遗传毒性检测的新办法2——UmuC实验

  Umu实验，即SOS/umu实验是，为了以一种高效和具有本钱效益的办法来进行环境监督测定开发的，特别是用于检测水和废水的遗传毒性。开始的规划办法是在试管中进行，现在适用于微孔板，并扩展到其他类型的样品(例如化学品、环境样品和药品)。

  正常状况下，菌体的SOS调理体系被LexA蛋白维持在按捺状况。当菌体DNA损害（因为辐射或化学物质）时，使无活性的RecA蛋白被激活 , 激活的RecA蛋白可与单链DNA（ssDNA)结合构成 RecA/SDNA 白体, 后者介导 LexA自我剪切, LexA蛋白水平下降可诱导 SOS调理子很多转录 LexA 基因, 一起也激活原被LexA蛋白阻挠的SOS相关基因 umuC和umuD基因。RecA被转化为作用于LexA的蛋白酶，然后按捺（激活）SOS体系，该体系反过来激活许多DNA修正基因，包含umu操纵子的基因。

  UmuC实验检测用菌株为鼠伤寒杆菌TA1535，带着质粒pSK1002，带着一个交融的umuC”lacZ基因。在该菌株中，lacZ因为umu操纵子的激活而上调，表达出有β半乳糖苷酶活性的交融蛋白。根据此酶分化邻硝根本 β-D-半乳糖苷（ONPG）的产品色彩深浅，经过定量检测被诱导酶的数量，判别DNA是否受损害及受损害的程度。

  细菌露出于96孔板中的不同浓度和低浓度的待测样品、阳性对照和阴性对照。随后进行孵育，2-3内经过分光光度计读数量化umuC启动子的激活状况。

  经过公式核算β-半乳糖苷酶的活性和存活率。β-半乳糖苷酶的表达呈剂量依赖性和明显地添加（与满足的生计相关），标明该样本导致了DNA应激。

  经过肝匀浆、去线别离进行代谢激活后，样品的诱变潜力可被直接评价。其成果根本上与Ames实验相同。

  即用型检测试剂盒，包含菌株、培养基、氨苄青霉素、S9、阳性对照，以96孔液体微孔板格局UmuC Easy CS供给。即用型试剂盒由菌株的表型、阳性对照以及大鼠肝微粒体部分S9进行质量操控，因此是一个更标准化的体系。继续进行S9和阳性对照的稳定性研讨、成长操控、毒性研讨。

  该产品还可用于HPTLC（高效薄层色谱）办法，以提高灵敏度和/或答应后续的生物或物理剖析。