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小 M 带你攻略细胞转染 - MedChemExpress

发布日期: 2024-10-05 12:23:43 来源:新闻中心

  Tips:在荧光试验进程中,能够恰当参加抗荧光淬灭剂(HY-K1042),缓解各种荧光染料的荧光淬灭,辅佐转染功率的荧光检测。

  转染(Transfection): 是凭借必定手法人工引进外源核酸(DNA 或 RNA)进入细胞的进程。转染意图:是特异性增强或按捺转染细胞中外源基因表达。

  转染类型: 依据在宿主细胞表达时刻长短,分为瞬时转染和安稳转染。瞬时转染中,外源基因没有整合到基因组上,仅存在于游离载体,短时刻内可取得基因表达产品。安稳转染中,外源基因整合到了基因组,可长时刻安稳地取得意图蛋白。

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  转染办法:依据外源核酸进入细胞的办法,转染办法主要有 3 种:化学办法、物理办法和生物办法。详细特色如下表所示:

  因为阳离子聚合物法简略易操作,转染功率高,一般是科研用户的常客。所以小M给咱们介绍细胞转染进程中,阳离子聚合物转染的原理和操作过程。

  转染试剂与外源核酸构成阳离子聚合物,胞吞到细胞,最终导致基因产品“蛋白”的发生

  长处:与其他办法比较,对多种常用细胞具有高水平转染功率;对原代细胞和难转染细胞也具有较好的作用;高效低毒、操作简略快捷、重复性好。

  操作过程1. 运用彻底成长培育基将细胞依照必定细胞密度,铺板于 96 孔细胞培育皿中,100 μL/well,于 37℃,5% CO2细胞培育箱中,过夜贴壁成长;2. 当细胞密度到达 70-90% 时,吸去原培育基,并参加无菌 PBS 缓冲液洗刷 2 次(贴壁性较差的细胞,可省掉此过程)。参加无血清培育基 80 μL/well;3. 96 孔板一般转染 0.25 μg/20 μL/well DNA 进行转染。依据 DNA (μg):转染试剂 (μL)= 1:3 份额制备转染试剂/ DNA 无血清培育基复合物,悄悄混匀,室温静置 15 min。

  4.依照 20 μL/ well 参加试剂- DNA/RNA 混合物,进行转染。于 37℃ 5% CO2细胞培育箱中持续培育 24-48 h(依据试验需求,能调整转染时刻为 24-96 h);有必要时在转染 6 h 更换为含血清培育基。5. 运用报告基因检测的新办法或在基因和蛋白水平对转染功率进行检测。

  选用MCE PolyFast 转染试剂 (HY-K1014),将外源基因瞬时转染到细胞。转染 24-48 小时,经过荧光试验点评转染功率。成果显现:在 293T 细胞中,RFP 阳性细胞份额高达 95%;在 BHK-21 细胞中,与竞品公司转染试剂比较,MCE PolyFast 转染试剂存在很明显优势。

  Tips:在荧光试验进程中,能够恰当参加抗荧光淬灭剂(HY-K1042),缓解各种荧光染料的荧光淬灭,辅佐转染功率的荧光检测。

  MCE的悉数的产品仅用作科学研究或药证申报,咱们不为任何个人用处供给产品和服务