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【维真生物-常识共享】RNAi常用工具比较:siRNA和sh

发布日期: 2024-10-16 12:45:07 来源:新闻中心

  shRNA和siRNA都是经过RNAi途径介导基因的缄默沉静,但两者转染前言、构建方法和细胞内加工进程不完全相同。

  siRNA能够在体外组成后经过转染进入细胞,也能够将其dsRNA前体转染入细胞,dsRNA在细胞质内经过一系列酶处理,构成siRNA,之后siRNA与RISC结兼并介导RISC与靶mRNA结合,导致靶mRNA的切开和降解。

  shRNA则需构建至表达载体中,使用质粒或病毒前言进入细胞,在细胞核内经过转录和剪切构成,之后shRNA转运出细胞核,在细胞质内经过Dicer酶处理后构成siRNA,从而导致靶mRNA的切开和降解。

  1. shRNA具有更长的作用时效:siRNA的稳定性较低,进入细胞后会逐步被降解,因而只能在短期内(一周左右)完成对靶基因的缄默沉静;shRNA凭借表达载体能够在细胞内很多转录,因而靶基因的缄默沉静时效更长,能继续数个星期。

  2. shRNA关于难转染的细胞作用更好:siRNA主要是经过转染进入细胞,难转染的细胞会极度影响siRNA的功用;shRNA可凭借病毒导入细胞,关于难转染的细胞依然有很高的导入功率,因而关于难转染的细胞搅扰作用更好。

  3. shRNA脱靶率更低:有依据阐明shRNA的脱靶更低,可能是因为siRNA在细胞质中逐步降解导致脱靶。