发布日期： 2024-09-19 06:23:45 来源：bb贝博官方平台
Annexin V作为一种磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，它通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V是检测细胞早期凋亡的灵敏指标。
A: Annexin V/PI测定用于通过annexin V标记区分早期凋亡细胞和通过丙碘胺（PI）标记区分坏死/死亡细胞。在早期凋亡阶段，细胞膜开始失去不对称性，导致磷脂酰丝氨酸（PS）转位到膜的外表面，在此处annexin V共轭物可以检测到它。然而，在细胞膜破裂的情况下，例如坏死，annexin V共轭物能进入并结合内层膜中的PS残基，导致假阳性结果。因此，建议使用不透过细胞膜的核染料（如PI）与annexin V共轭物一起使用。这使用户都能够区分早期凋亡细胞（annexin V染色）、晚期凋亡细胞（annexin V和PI染色）和坏死细胞（仅PI染色）。
A: 末端脱氧核苷酸转移酶 dUTP 缺口末端标记 (TUNEL) 是一种染色方法，用于识别细胞内 DNA 片段化位点——晚期细胞凋亡的标志性特征。 它使用酶末端脱氧核苷酸转移酶 (TdT) 将修饰的 dNTP（例如 dUTP）连接到片段化 DNA 链的 3-羟基末端。 dNTPs 通常用荧光团修饰以促进量化和/或可视化。
Annexin V 染色通过结合由于细胞膜不对称性丧失而暴露在细胞外的 PS 残基来识别细胞凋亡的早期阶段。 Annexin V 通常用 FITC 等荧光团标记，以促进凋亡细胞的检测。
A: Annexin V阳性根据结果得出细胞处于凋亡的早期状态，该术语通常用于Annexin V/PI检测，通过根据细胞群的健康情况来区分细胞群。详情如下：
A: Annexin V阳性对照是使用已知的细胞凋亡诱导方法诱导凋亡的细胞。 当用Annexin V 偶联物（例如膜联蛋白 V-FITC）染色时，这些细胞会产生阳性信号。 例如，细胞凋亡可通过在 55°C 下加热细胞 20 分钟或处理已知可诱导细胞凋亡的细胞试剂（如喜树碱或星形孢菌素）来诱导。
A: 在实验样品中，Annexin V结合缓冲液可以在一定程度上促进Annexin V与磷脂酰丝氨酸(PS)结合。这些结合缓冲液需要含有足够高浓度的钙，使Annexin V与PS结合，但不能高到与其他磷脂结合。Annexin V结合缓冲液也可用于洗涤样品，使其不含过量的膜联蛋白和其他化学残留物质，以确保检测。染色前，应将细胞重悬于浓度为1x10^6/ml的Annexin V结合缓冲液中。
A: Annexin V 通过结合暴露在细胞膜外侧的磷脂酰丝氨酸 (PS) 残基来识别正在发生凋亡的细胞。 在活的健康细胞中，PS 残基位于质膜的内层，在那里它们无法与膜联蛋白 V 结合。 当细胞启动程序性细胞死亡（细胞凋亡）时，它们的质膜会失去不对称性。 PS 残基从膜的内部转移到外部小叶，在那里它们能与膜联蛋白 V 结合。 Annexin V 通常与荧光团（如 FITC）结合，以促进凋亡细胞的检测。
A: 可以，细胞可以在Annexin V染色后做固定操作。若需要固定细胞，请满足以下三个条件：1.使用不含酒精的醛类固定。2.请使用含有CaCl2的缓冲液。3.避开使用洗涤剂或表面活性剂。需要注意的几点：在Annexin V染色前，绝对不能固定细胞，固定细胞会杀死细胞，而Annexin V染色只能在活细胞或组织上进行。
A: 是的，Annexin V可以染色坏死细胞。坏死是指不正常的细胞死亡，可能由各种事件触发，包括组织缺血和缺氧或细胞区域的急性损伤。坏死细胞的一个关键特征是质膜破裂。这个事件使得Annexin V能进入整个质膜，包括PS残基存在的内叶片，导致假阳性。因此，建议使用细胞不渗透染料（例如丙碘锭或7-AAD）与Annexin V结合物相结合，以消除假阳性并区分凋亡细胞和死亡细胞。图中使用Annexin V将凋亡细胞染成绿色，使用7-AAD将坏死细胞染成红色。
A：细胞染色完成后，禁止固定，应尽快检测，若无法立即检测，可将样本管放冰上，减少外界环境对检测结果的影响，Annexin V 结合不稳定，请务必在标记结束后半小时内检测。
A: Annexin V凋亡实验在做凋亡统计时一般统计细胞早期凋亡率，也有文献统计总的凋亡比例（早期凋亡和晚期凋亡或坏死细胞之和）。
A：如果样品来源于血液，请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有 PS，能与 Annexin-V 结合，从而对实验结果产生干扰。
A：检测贴壁细胞时，若消化时间不易控制，建议用 Accutase 细胞消化液，对细胞损伤小且不会改变细胞膜上 PS 的分布。
Q: 细胞凋亡早期，可以用Annexin V-FITC/PI双染色法区分活细胞、早期凋亡细胞和坏死细胞吗?
A: 在正常的活细胞中，磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine，PS）位于细胞膜的内侧，细胞发生凋亡时，细胞膜发生明显的变化，PS从细胞膜的内表面翻转到细胞膜的外表面。Annexin-V（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力结合。用荧光素（FITC、Alexa Fluor488等）标记的Annexin-V作为探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜即可鉴别凋亡细胞和活细胞。
坏死的细胞PS同样也会从细胞膜的内表面翻转到细胞膜的外表面，Annexin-V也能识别坏死细胞表面的PS,所以Annexin-V无法区分坏死细胞和凋亡细胞。另外碘化丙啶(propidine iodide,PI)是一种核酸染料，能够与细胞内DNA结合，而且它不可以透过完整的细胞膜。早期凋亡细胞和活细胞的细胞膜仍然完整，PI染料无法自由通过细胞膜进入细胞内与DNA结合，所以PI染料无法标记凋亡细胞和活细胞，而PI染料却可以通过坏死细胞的细胞膜与细胞内的DNA结合，坏死细胞内的PI染料被488nm激光激发后会发射红荧光，被相应通道接收。所以Annexin V和PI同时使用，就可以区分活细胞、早期凋亡细胞和坏死细胞。
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